蛋白乳化性质的研究

摘要:乳化性质是蛋白质的一项重要功能性质,包括乳化活性和乳化稳定性。本文主要通过对蛋白乳化性质的介绍,综述了其测定方法、不同的处理方式和不同的物化因素对乳化性的影响。
关键词:蛋白质 乳化性 测定方法 影响因素

1 前言

乳化性质(Emulsibility)是蛋白质的一项重要的功能性质,是指油品和水形成乳状液的能力,包括乳化活性(Emulsifying Properties)和乳化稳定性(Emulsifying stability)两个方面。乳化活性是指蛋白质在促进油水混合时,单位质量的蛋白质(g)能够稳定的油水界面的面积(m2);乳化稳定性是指蛋白质维持油水混合不分离的乳化特性对外界条件的抗应变能力。
    蛋白质乳化性是指蛋白质能使油与水形成稳定的乳化液而起乳化剂的作用[1]

2 乳化性质的测定方法

2.1 乳化活性的测定方法

2.1.1 分光光度法

阮诗丰[2]等人采用722S型分光光度计对大豆分离蛋白乳化活性进行了测定。课题中具体的试验方法如下:用微量取样器取出底部的乳状液50μL,用0.1%(W/V)SDS(十二烷基硫酸钠)溶液稀释到一定倍数后放入比色皿中,以相同的SDS溶液作参比液,立即测定其在500nm处的吸光度A。根据赵国华等[3]的方法进行简化,乳化活性EA用零时刻的吸光度来表征:
EA=A0
或用乳化活性指数,即每克蛋白质的乳化面积来表示[4]

式中:C:溶液中样品蛋白质浓度;Φ:油相体积分数;N:稀释倍数
用分光光度计法测定多种大豆分离蛋白的乳化活性,每种测定均重复多次,计算结果的标准方差(SD:Standard deviation)和变异系数(CV:coefficient of variation)来反映此测定方法重复性。
邓塔[5]等人在研究大豆蛋白乳化性质的课题中,以脱脂大豆粉为实验对象,取一定体积质量分数为2.0%的蛋白质溶液,加入同体积的大豆色拉油,以6400r/min的速度高速搅拌2min,之后在0min取样100,以0.1%(w/v)SDS(十二烷基磺酸钠,pH=7.0)稀释50倍,以SDS溶液为空白,测定500nm处的吸光度值,以0min的吸光度值表示乳化性(EA)。

2.1.2 电导法

    称取一定量的大豆分离蛋白,溶解后使蛋白质溶液浓度在0.3 %~0.5%( w/v),10000 r/min 高速搅拌,同时用蠕动泵以4.0 mL/min的速度匀速向其中滴加大豆色拉油,用雷磁数据采集软件采集电导值数据,当电导值发生突变时,停止加油,记录耗油量 Vk。测定不同质量的蛋白质乳化油脂的量,通过多组数据进行回归分析,计算出蛋白质的乳化能力 EC[6]
Y=aX+b
    其中
        Y:总耗油量Vk(mL)
        X:蛋白质量M(g)
        A:该种蛋白质的EC(mL/g)

2.2 乳化稳定性的测定方法

2.2.1 分光光度法

    分光光度法测蛋白乳化稳定性的原理是乳化性越好,颗粒越小,吸光度越小;乳化稳定性越好,吸光度随时间的变化越小,也即是粒径变化不大。
    高丽[7]等人对大豆蛋白乳化稳定性进行了研究,课题中以优质大豆为研究对象,采用分光光度法测定的大豆蛋白的乳化稳定性。具体方法如下:将豆乳用蒸馏水稀释28倍,用离心机以4000r/min离心5min,于785nm波长下测定离心前后的吸光度A。用下式计算豆奶的稳定性
R=A2/A1
式中,R为稳定性系数;A2为离心后的吸光度;A1为离心前的吸光度。R≤1,R值越大,说明豆乳的稳定性越好。
    管军军[8]等人采用分光光度法对大豆分离蛋白的乳化稳定性进行了测定,结果表明,用吸光值比K可较好地表示乳化稳定性。取9 mL0.1%(W/V)待测样品蛋白液(样品蛋白溶于0.2 mol/L、pH7.0磷酸缓冲液中),加入3 mL大豆色拉
油,在10 000 r/min,25℃下搅拌1 min,分别在搅拌后0 min、5 min取样。以0.1%(W/V)SDS(pH7.0)稀释50倍,测定在500 nm处的吸光值,以SDS溶液为空白,以0时刻的吸光值表示乳化性(EA)。乳化稳定性(ES)用乳化稳定指数(ESI)表示:

式中:A0———0时刻的吸光值;
      ΔT———时间差,min;
      ΔA———ΔT内的吸光值差
上式可写成:

式中:At———t时刻的吸光值。
    令K=At/A0,则当ΔT一定时,K与ESI成正比关系。为了避免计算时出现ΔA为0及负值,我们引进吸光值比K来描述乳化稳定性,这里K=A5/A0(A5为t=5 min时的吸光值)。
顾楠[9]等人在研究不同处理方式对鹰嘴豆分离蛋白乳化性质的影响实验课题中,采用分光光度法测定乳化稳定和乳化活性。具体方法如下:取一定量的鹰嘴豆分离蛋白溶于100mL的蒸馏水( 或一定离子强度的盐溶液) 中,调节所需的pH,量取一定体积的大豆色拉油于蛋白溶液,以10000r/min的速度高速搅拌 2min,制成白色乳状液。分别在0min和15min时取0.5ml乳状液置于50mL的容量瓶中,加入0.1%(w/v)SDS(pH7.0)溶液定容并摇匀,以0.1%SDS溶液作空白,在500nm处测定其吸光度A,其中0min时吸光度A

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